Nečistoče tirzepatida

Nečistoče tirzepatida|Nadzor nečistoč tilpeptida|Sinteza nečistoč po meri in potrditev strukture|Znanstveni-peptid

Nadzor nečistoč s tirzepatidom - za GLP-1/GIP z dvojno-tarčno raziskavo kakovosti zdravil, generično poročanje o zdravilih. Znanost-Peptid zagotavlja sintezo po meri nečistoč, povezanih s tilpeptidom, vključno z delecijskimi peptidi, oksidiranimi nečistočami, produkti za luščenje maščobnih kislin, dimeri itd., s strukturnimi potrditvenimi podatki za podporo vašim vašo študijo spektroskopije nečistoč s podatki o strukturni potrditvi. Vabljeni, da nas kontaktirate.

Tirzepatid (Tirzepatide) je dvojni agonist GLP-1/GIP, ki ga je izumila Eli Lilly in je v polnem zagonu ti dve leti. Dobro znižuje sladkor in močno znižuje telesno težo, imenujejo pa ga nadgrajena različica »čudežnega zdravila za hujšanje«. Domači proizvajalci peptidnih generičnih zdravil, mnogi strmijo vanj – po izteku patenta, kdo lahko prvi preleti kakovost raziskave, kdo bo imel priložnost zgrabiti prvega generika.

 

Vendar kakovosti tilpeptida ni tako enostavno preučiti. Je kompleksnejši od simetikona, saj vsebuje 39 aminokislin, stransko verigo maščobnih kislin (eikozandiojsko kislino) in povezovalno vezje. Nečistoče, ki se lahko pojavijo med procesom sinteze, so veliko večje kot pri običajnih peptidih. Manjkajoči peptidi, oksidativne nečistoče, produkti izločanja maščobnih kislin, dimeri, povezovalci-povezane nečistoče morajo imeti nadzor, vsaka mora biti jasna.

 

Nabrali smo veliko izkušenj pri sintezi kompleksnih peptidnih nečistoč. Specializirali smo se za preučevanje tilpeptida in vemo, kakšne so težave v njegovem profilu nečistoč in kateri so bistveni kontrolni elementi. Sintezo različnih kontrol nečistoč tilpeptida lahko prilagodimo vašim potrebam, s podatki o potrditvi strukture in vam pomagamo vzpostaviti metodo, tako da je manjša verjetnost, da vam bodo pri vložitvi izdali dodatek.

Molekularna struktura tilpeptida določa, da je njegov profil nečistoč veliko bolj zapleten kot profil splošnih peptidov. Ko izvajamo študije nečistoč, se osredotočamo predvsem na te kategorije:

Manjkajoči peptid
39 aminokislin, od katerih katera koli med procesom sinteze izgine, je nečistoča. Retenzijski časi manjkajočih peptidov na HPLC so bili široko porazdeljeni, z različno polarnostjo manjkajočih peptidov v različnih položajih. Nekatere manjkajo na N-koncu, nekatere na sredini in nekatere blizu mesta vezave maščobne kisline. Od stranke smo prejeli naročilo za 15 manjkajočih peptidov na različnih mestih, da lokaliziramo vse morebitne manjkajoče nečistoče v njihovem procesu.

Oksidativne nečistoče
Met v zaporedju tilpeptida je dovzeten za oksidacijo v sulfoksid in nato v sulfon. Oksidirane nečistoče se pogosto pojavijo v študijah stabilnosti in po določenem času rastejo. Naredili smo primerjavo, v pospešenih pogojih za en mesec lahko vrh oksidacije brez nadzora naraste na več kot 0,3%.

Izdelki za izločanje maščobnih kislin
To je edinstvena nečistoča za tilpeptid. Njegova stranska veriga maščobne kisline (eikozandiojska kislina) je pritrjena na lizin prek povezovalca in ta modifikacija se lahko med sintezo ali shranjevanjem delno odloči, zaradi česar maščobna kislina-odstranjuje nečistoče. Bolj problematično je, da lahko do izločanja pride na različnih lokacijah - med maščobno kislino in povezovalnikom ali med povezovalcem in peptidom -, kar povzroči različne nečistoče. Za naše stranke smo sintetizirali več nečistoč,-povezanih z maščobnimi kislinami, od popolnega odvajanja do le majhnega dela.

Dimeri/polimeri
Dve ali več molekul tilpeptida se združijo v skupine in tvorijo dimer ali več. Molekulska masa dimera je dvakrat večja od glavnega vrha in je pogosto širok vrh na HPLC, zato ga je treba posebej ločiti in očistiti, preden ga lahko uporabimo kot kontrolo. Izvedli smo pripravo dimerjev in potrebnih je bilo več krogov čiščenja, da smo dosegli več kot 95-odstotno čistost.

Nečistoče,-povezane s povezovalnikom
Modifikacija tilpeptida z maščobno kislino uporablja povezovalec (npr. -Glu, PEG itd.), ta povezovalec sam pa lahko povzroči stranske reakcije med sintezo, pri čemer nastanejo nečistoče z manjkajočimi ali nepopolnimi povezovalci. Te vrste nečistoč ni v običajnih peptidih, ampak je edinstvena za tilpeptid, ki ga je treba posebej preučiti.

Deamidirane nečistoče
Asparagin (Asn) in glutamin (Gln) se zlahka deamidirata v kislih ali segretih pogojih, kar povzroči izomere. V zaporedju tilpeptida je več Asn in Gln, deamidacijska nečistota pa se pogosto pojavi pri testu prisilne razgradnje, zato je treba za lociranje nečistote uporabiti kontrolni produkt.

Diastereoizomeri
Med dolgoverižno sintezo so lahko posamezne aminokisline podvržene racemizaciji, kar ima za posledico diastereoizomere. Vsebnost tovrstnih primesi običajno ni visoka, vendar se bodo strokovnjaki pri deklaraciji vprašali, za potrditev pa je bolje imeti kontrolni izdelek.

Veliko teh nečistoč ni mogoče kupiti in jih je treba sintetizirati po meri. Izvedli smo veliko projektov prilagajanja tilpeptidnih nečistoč, ki pokrivajo vse zgoraj navedene kategorije.

Izbris peptidne serije
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95 % z MS in NMR potrditvijo. Sintetizirali smo niz peptidov s 5 aminokislinskimi razmiki od N-terminala do C-terminala.

Oksidativne nečistoče
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 % in lahko zagotovimo LC-MS spekter za potrditev stopnje oksidacije. Sulfoksid in sulfon ločimo s HPLC in lahko naredimo oboje.

Izdelki za izločanje maščobnih kislin
To je ena najtežjih nečistoč v tilpeptidu. Veriga maščobnih kislin je lahko popolnoma izključena ali pa je lahko delno (npr. manjka zadnjih nekaj ogljikov). Sintetiziramo lahko vrsto variant za različne položaje verige. V enem najbolj zapletenih projektov, ki smo jih izvedli, nas je stranka prosila, naj sintetiziramo nečistočo z 8 ogljikovimi atomi, ki manjkajo v verigi maščobnih kislin, in potrebovali smo dva meseca, da smo to pravilno uredili.

Dimer
Dimere, ki nastanejo z navzkrižnim -povezovanjem ali ne-kovalentnimi interakcijami, je mogoče pripraviti z različnimi metodami ter jih izolirati in prečistiti, da se zagotovijo kontrole visoke čistosti. Dimerje je težko očistiti, vendar imamo izkušnje, da vemo, kako ločiti monomere.

Nečistoče,-povezane s povezovalnikom
Povezovalec (-Glu, PEG itd.) morda manjka ali je nepopoln, kar ima za posledico vrsto povezanih nečistoč. Sintetiziramo lahko različne različice z manjkajočimi povezovalci, skrajšanimi povezovalci ali neujemajočimi se povezovalci in vam pomagamo sestaviti spektre takšnih nečistoč.

Deamidirane nečistoče
Za mesta Asn in Gln v zaporedju lahko pripravimo deamidirane kontrole nečistoč s prisilno razgradnjo ali ciljno sintezo. Razlika v molekulski masi po deamidaciji je le 1, kar ni enostavno razločiti z MS, zato za potrditev običajno uporabimo NMR ali posebne kromatografske pogoje.

Druge nečistoče po meri
Če v svoji raziskavi najdete novo neznano nečistočo, vam lahko pomagamo analizirati strukturo in jo sintetizirati. Pošljite nam vzorce, naredili bomo analizo LC-MS, izpeljali strukturo, nato usmerjeno sintezo in nato primerjali retencijski čas in masni spekter, da potrdimo dogovor. Ta postopek smo izvedli že večkrat in stopnja uspešnosti je precej visoka.

Razvoj in validacija analitične metode
Pri nastavitvi metode HPLC ali LC-MS je potrebna kontrola nečistoč za lokalizacijo, določanje ločevanja, preverjanje linearnega območja in izkoristek. Brez nadzora validaciji metode manjka delček. Številne stranke nas prosijo, da najprej naredimo nekaj ključnih nečistoč, da vzpostavimo metodo, nato pa počasi nadomestimo ostalo.

Heterogena masna spektrometrija
Pri deklaraciji generičnega zdravila je potrebna celovita kvalitativna in kvantitativna analiza procesnih nečistoč in produktov razgradnje. Lokacijo, vsebnost in strukturo vsake nečistoče je treba potrditi s kontrolnim izdelkom. Videli smo, da je bila deklaracija o informacijah poslana za izpolnitev, devetkrat od desetih je nečistoč tega kosa ni razumel.

Študije stabilnosti
Pri dolgoročni-testih stabilnosti in pospešenih preskusih je treba ugotoviti, kateri produkti razgradnje prevladujejo in kakšen je trend vsebine. Z nadzorom nečistoč lahko natančno kvantificiramo in spremljamo. Stranka je preverjala stabilnost priprave tilpeptida in ugotovila, da je vrh razgradnje rasel zelo hitro v pospešenih pogojih, zato smo ga analizirali in sintetizirali z MS, da bi potrdili strukturo, nato pa je stranka z olajšanjem poročala o tem.

Testiranje sproščanja serije
Po komercializaciji je treba vsako serijo učinkovine ali formulacije testirati na zadevno snov. Kontrole nečistoč so bistvena orodja za testiranje sproščanja.

Informacije o generičnih deklaracijah zdravil
Študije nečistoč so ključni del informacij o vložitvi. Zagotavljanje popolnega profila nečistoč in kontrolnih podatkov bistveno zmanjša tveganje izdaje pregleda.

Primer 1: farmacevtsko podjetje, program generičnih zdravil tilpeptid
Razvijajo generično različico tilpeptida in potrebujejo celoten nabor kontrol nečistoč za validacijo metode. Zanje smo prilagodili 12 nečistoč: 5 manjkajočih peptidov, 2 oksidirani nečistoči, 1 dimer, 2 produkta izločanja maščobnih kislin in 2 nečistoti, povezani s povezovalnikom-. Vsak od njih ima čistost več kot 95 %, spremljajo pa ga MS in NMR podatki. Vodja projekta je dejal: "Nečistoče tilpeptida so dvakrat večje od drugih peptidov, vendar jih lahko naredite vse in podatki so popolni, kar nam prihrani veliko dela." Kasneje je bila uspešno opravljena validacija njihove metode, sedaj pa se pripravljajo na razglasitev.

Primer 2: CRO podjetje, profiliranje nečistoč
Lotili so se kakovostnega raziskovalnega projekta tilpeptida, ki je zahteval celovito analizo procesnih nečistoč. Poslali so nam vzorce surovih peptidov in izvedli smo analizo LC-MS, sklepali o možnih strukturah več neznanih nečistoč, jih nato ciljano sintetizirali ter primerjali retenzijske čase in masne spektre ter potrdili štiri nove nečistoče - dve od njih sta bili povezani s povezovalnikom-, dve pa sta bili različici izločanja maščobnih kislin. Stranka je te podatke uporabila za izboljšanje profilov nečistoč in uspešno prestala naročnikovo sprejemljivost.

Primer 3: Študije stabilnosti, biotehnološko podjetje
Preiskovali so stabilnost formulacije tilpeptida in ugotovili, da se količina produkta razgradnje v pospešenih pogojih hitro povečuje, vendar niso vedeli, kaj je to. Vzorec smo analizirali z LC-MS in domnevali, da gre za nečistoto deamidacije na določenem mestu Asn, nato pa jo ciljano sintetizirali in potrdili s primerjavo. Vzpostavili so test z uporabo te kontrole in natančno spremljali trend produkta razgradnje. Kasneje, ko so oddali poročilo, so ta del podatkov strokovnjaki poudarili in zaradi trdnih podatkov odškodnine niso izdali.

Tilpeptid je priljubljen izdelek, vendar je preučevanje nečistoč občutljivo delo, zlasti izdelkov za luščenje z maščobnimi kislinami in nečistoč, povezanih s povezovalci-, ki jih mnogi proizvajalci ne zmorejo. Če izvajate kakovostne raziskave ali generični razvoj tilpeptida in potrebujete nadzor nečistoč, nas kontaktirajte. Opravili smo veliko dela, vemo, kakšne so težave, in znamo jih rešiti.