Nečistoče semaglutida

Nečistoče semaglutida|Kontrola nečistoč simeglutida|Sinteza nečistoč po meri in potrditev strukture|Znanstveni-peptid

Soma Lutide (Simeglutide) nadzor nečistoč - za GLP-1 študija kakovosti zdravil, predložitev generičnih zdravil. Znanost-Peptide zagotavlja prilagojeno sintezo nečistoč, povezanih s Soma Lutidom, vključno z manjkajočimi peptidi, oksidiranimi nečistočami, produkti luščenja maščobnih kislin, nečistočami, povezanimi z verigo PEG, itd., skupaj s podatki o strukturni potrditvi. Lahko podpremo vaše raziskave profila nečistoč. Vabljeni, da nas kontaktirate.

Semaglutid (znan tudi kot semaglutid) je bil ta leta v ognju. Novo Nordisk se nanj zanaša, da bo tržno vrednost potisnil na drugo mesto na svetu, domači proizvajalci peptidnih generičnih zdravil skoraj nihče ne strmi vanj. Peroralne dozirne oblike in dozirne oblike za injiciranje so vse velike trge. Kdo bo po poteku patenta lahko prvi naredil kakovostno raziskavo, kdo bo imel možnost zagrabiti prvega generika.

 

Vendar pa je študija kakovosti somatostatina, odkrito povedano, težja kot študija mnogih peptidov. Je 31-peptid z verigo maščobne kisline (oktadekandiojska kislina) in PEG veznikom. Ta struktura določa, da je njen spekter nečistoč še posebej bogat - manjkajoči peptidi, oksidirane nečistoče, produkti izločanja maščobnih kislin, nečistoče, povezane z verigo PEG, dimeri morajo imeti nadzor, vsak mora biti čist. Zlasti veriga PEG, ki je ni v običajnih peptidih, je edinstvena za Somalutide.

 

Nabrali smo veliko izkušenj pri sintezi kompleksnih peptidnih nečistoč. Specializirali smo se za preučevanje somatostatina in vemo, kakšne so težave pri njegovem profilu nečistoč in katere so bistvene kontrolne postavke. Sintezo različnih kontrol nečistoč semaglutida lahko prilagodimo glede na vaše potrebe, s strukturnimi potrditvenimi podatki in vam pomagamo vzpostaviti metodo, tako da bo manjša verjetnost, da vam bodo pri vložitvi izdali dodatek.

Molekularna struktura somatostatina določa, da je njegov profil nečistoč veliko bolj zapleten kot profil navadnih peptidov. Ko izvajamo študije nečistoč, se osredotočamo predvsem na te kategorije:

Manjkajoči peptid
31 aminokislin, od katerih katera koli med procesom sinteze izgine, je nečistoča. Retenzijski časi manjkajočih peptidov na HPLC so bili široko porazdeljeni, z različno polarnostjo manjkajočih peptidov v različnih položajih. Nekatere manjkajo na N-koncu, nekatere na sredini in nekatere blizu mesta vezave maščobne kisline. Prejeli smo naročilo od stranke, ki je prosila za približno ducat manjkajočih peptidov na različnih mestih, da bi poiskala vse možne manjkajoče nečistoče v svojem procesu.

Oksidativne nečistoče
Somalutid ima v svojem zaporedju metionin (Met), ki je dovzeten za oksidacijo v sulfoksid in nato v sulfon. Oksidirane nečistoče se pogosto pojavijo v študijah stabilnosti in po določenem času rastejo. Naredili smo primerjavo, v pospešenih pogojih za en mesec lahko vrh oksidacije brez nadzora naraste na več kot 0,3%.

Izdelki za izločanje maščobnih kislin
Stranska veriga maščobne kisline (oktadekandiojska kislina) somatostatina je pritrjena na lizin preko povezovalca in ta modifikacija se lahko med sintezo ali shranjevanjem delno odloči. Bolj problematično je, da lahko do izločanja pride na različnih lokacijah - med maščobno kislino in povezovalnikom ter med povezovalcem in peptidom -, kar povzroči različne nečistoče. Za naše stranke smo sintetizirali več nečistoč,-povezanih z maščobnimi kislinami, od popolnega odvajanja do le majhnega dela.

Nečistoče,-povezane z verigo PEG
To je najbolj specifična vrsta nečistoč v somatostatinu. Ima povezovalec PEG (polietilen glikol), veriga PEG pa se lahko med sintezo zlomi, skrajša ali polimerizira, kar povzroči vrsto povezanih nečistoč. Teh nečistoč ni v navadnih peptidih, ampak so edinstvene za somatostatin in jih je težko preučiti v študijah kakovosti. Izdelali smo različne variante delecije verige PEG, krajšanja verige PEG in oksidacije verige PEG.

Dimeri/polimeri
Dve ali več molekul somatostatina se združujejo in tvorijo dimer ali več. Molekulska masa dimera je dvakrat večja od glavnega vrha in je pogosto širok vrh na HPLC, zato ga je treba posebej ločiti in očistiti, preden ga lahko uporabimo kot kontrolo. Izvedli smo pripravo dimerjev in potrebnih je bilo več krogov čiščenja, da smo dosegli več kot 95-odstotno čistost.

Deamidirane nečistoče
Asparagin (Asn) in glutamin (Gln) se zlahka deamidirata v kislih ali segretih pogojih, kar povzroči izomere. V zaporedju somatostatina je več Asn in Gln, deamidacijska nečistota pa se pogosto pojavi pri testu prisilne razgradnje, zato je treba za lociranje nečistoče uporabiti kontrolni produkt.

Diastereoizomeri
Med dolgoverižno sintezo so lahko posamezne aminokisline podvržene racemizaciji, kar ima za posledico diastereoizomere. Vsebnost tovrstnih primesi običajno ni visoka, vendar se bodo strokovnjaki pri deklaraciji vprašali, za potrditev pa je bolje imeti kontrolni izdelek.

Veliko teh nečistoč ni mogoče kupiti in jih je treba sintetizirati po meri. Naredili smo že veliko projektov prilagajanja nečistoč somatostatina, ki pokrivajo vse zgoraj navedene kategorije.

Izbris peptidne serije
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95 % z MS in NMR potrditvijo. Sintetizirali smo niz peptidov s 5 aminokislinskimi razmiki od N-terminala do C-terminala.

Oksidativne nečistoče
Met in Somatostatin is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. The purity of the product is >95 % in lahko zagotovimo LC-MS spekter za potrditev stopnje oksidacije. Sulfoksid in sulfon ločimo s HPLC in lahko naredimo oboje.

Izdelki za izločanje maščobnih kislin
To je glavni poudarek nečistoč Somalutida. Veriga maščobnih kislin je lahko popolnoma ali delno odstranjena. Sintetiziramo lahko vrsto variant za različne položaje osipanja. V enem najbolj zapletenih projektov, kar smo jih kdaj izvedli, nas je stranka prosila, naj sintetiziramo nečistočo s 6 ogljikovimi atomi, ki manjkajo v verigi maščobnih kislin, in potrebovali smo dva meseca, da smo to pravilno uredili.

Nečistoče,-povezane z verigo PEG
To je ena najtežjih nečistoč somatostatina in je tudi naša moč. Veriga PEG lahko manjka, je skrajšana, zlomljena, oksidirana in lahko nastanejo različne različice. Naredili smo nečistočo s popolnoma manjkajočo verigo PEG (tj. de-PEGilirani somatostatin), različico s prepolovljeno dolžino verige PEG in produkt z oksidirano verigo PEG. Stranka je dobila te kontrole in spekter nečistoč, povezanih s PEG-, je bil v celoti določen.

Dimer
Dimere, ki nastanejo z navzkrižnim -povezovanjem ali ne-kovalentnimi interakcijami, je mogoče pripraviti z različnimi metodami ter jih izolirati in prečistiti, da se zagotovijo kontrole visoke čistosti. Dimerje je težko očistiti, vendar imamo izkušnje, da vemo, kako ločiti monomere.

Deamidirane nečistoče
Za mesta Asn in Gln v zaporedju lahko pripravimo deamidirane kontrole nečistoč s prisilno razgradnjo ali ciljno sintezo. Razlika v molekulski masi po deamidaciji je le 1, kar ni enostavno razločiti z MS, zato za potrditev običajno uporabimo NMR ali posebne kromatografske pogoje.

Dther prilagojene nečistoče
Če v svoji raziskavi najdete novo neznano nečistočo, vam lahko pomagamo analizirati strukturo in jo sintetizirati. Pošljite nam vzorec, izvedli bomo analizo LC-MS, špekulirali o strukturi, nato usmerjeno sintezo in nato primerjali retencijski čas in masni spekter, da potrdimo dogovor. Ta postopek smo izvedli že večkrat in stopnja uspešnosti je precej visoka.

Razvoj in validacija analitične metode
Pri nastavitvi metode HPLC ali LC-MS je potrebna kontrola nečistoč za lokalizacijo, določanje ločevanja, preverjanje linearnega območja in izkoristek. Brez nadzora validaciji metode manjka delček. Številne stranke nas prosijo, da najprej naredimo nekaj ključnih nečistoč, da vzpostavimo metodo, nato pa počasi nadomestimo ostalo.

Heterogena masna spektrometrija
Pri deklaraciji generičnega zdravila je potrebna celovita kvalitativna in kvantitativna analiza procesnih nečistoč in produktov razgradnje. Lokacijo, vsebnost in strukturo vsake nečistoče je treba potrditi s kontrolnim izdelkom. Videli smo, da je bila deklaracija o podatkih poslana, da bi se nadoknadila, devetkrat od desetih je nečistoč tega kosa ni razumel.

Študije stabilnosti
Pri dolgoročni-testih stabilnosti in pospešenih preskusih je treba ugotoviti, kateri produkti razgradnje prevladujejo in kakšen je trend vsebine. Z nadzorom nečistoč je mogoče natančno kvantificirati in spremljati. Stranka je preverjala stabilnost pripravka somatostatina in ugotovila, da je vrh razgradnje hitro rasel v pospešenih pogojih, zato smo ga analizirali z MS in sintetizirali, da bi potrdili strukturo, nato pa je stranka z olajšanjem poročala o tem.

Testiranje sproščanja serije
Po komercializaciji je treba vsako serijo učinkovine ali formulacije testirati na zadevno snov. Kontrole nečistoč so bistvena orodja za testiranje sproščanja.

Informacije o generičnih deklaracijah zdravil
Študije nečistoč so ključni del informacij o vložitvi. Zagotavljanje popolnega profila nečistoč in kontrolnih podatkov bistveno zmanjša tveganje izdaje pregleda.

Primer 1: Farmacevtsko podjetje, program generičnih zdravil Somalutide
Razvijajo generično različico somatostatina in potrebujejo celoten nabor kontrol nečistoč za validacijo metode. Zanje smo prilagodili 15 nečistoč: 6 manjkajočih peptidov, 2 oksidirani nečistoči, 1 dimer, 2 produkta za piling z maščobnimi kislinami, 3 nečistoče, povezane z verigo PEG, in 1 nečistoča zaradi deamidacije. Čistost vsakega je bila nad 95 % s podatki MS in NMR. Vodja projekta je dejal: "Nečistoče Somalutida so bolj zapletene kot drugi peptidi, še posebej tisti PEG, ki smo ga iskali pri številnih podjetjih, vendar so vsa rekla, da tega ne morejo storiti. Vendar ste lahko naredili vse in podatki so bili popolni, kar je bilo v veliko pomoč." Kasneje je bila validacija njihove metode uspešno zaključena in zdaj se pripravljajo na vložitev.

Primer 2: CRO, posebna študija nečistoč v verigi PEG
Lotili so se kakovostnega raziskovalnega projekta o somatostatinu, ki je zahteval celovito analizo nečistoč, povezanih z verigo PEG. Sistematično smo sintetizirali nečistoče, povezane s PEG-: popolno odsotnost verige PEG, prepolovitev dolžine verige PEG, oksidacijo koncev verige PEG in prekinitev verige PEG na dva dela. sintetiziral skupno 8 nečistoč, povezanih s PEG-. Stranka je uporabila te kontrole za vzpostavitev celotnega nabora metod za odkrivanje nečistoč PEG, kar je postalo vrhunec njihovih informacij o vložitvi.

Primer 3: Študije stabilnosti, biotehnološko podjetje
Delali so študijo stabilnosti formulacije somatostatina in ugotovili, da se vsebnost produkta razgradnje v pospešenih pogojih hitro povečuje, vendar niso vedeli, kaj je to. Vzorec smo analizirali z LC-MS, domnevali, da gre za nečistočo, ki izloča maščobno kislino na določeni lokaciji, nato pa jo ciljano sintetizirali in potrdili s primerjavo. Vzpostavili so test z uporabo te kontrole in natančno spremljali trend tega produkta razgradnje. Kasneje, ob oddaji poročila, so strokovnjaki ta del podatkov poudarili in zaradi trdnosti podatkov niso izdali odškodnine.

Somatostatin je zelo priljubljen izdelek, vendar je preučevanje nečistoč občutljivo delo, zlasti nečistoč, povezanih z verigo PEG, in produktov za luščenje maščobnih kislin, ki jih mnogi proizvajalci ne zmorejo. Če izvajate kakovostne raziskave ali generični razvoj somatostatina in potrebujete nadzor nečistoč, dobrodošli, da se pogovorite z nami. Opravili smo veliko dela, vemo, kakšne so težave, in znamo jih rešiti.