Dolga peptidna sinteza (do 189 aminokislin)

Dolga peptidna sinteza|Dolgoverižni peptid po meri|Težavna sinteza peptidov|Peptidi nad 50 mer|Znanstveni-peptid

Potrebujete dolg peptid z več kot 50 aminokislinami? Storitev Science-Peptide's Long Peptide Synthesis pokriva 50-189 aminokislin, s strategijo segmentirane sinteze, premagovanjem težav hidrofobnega združevanja in nizke učinkovitosti sinteze itd. 20 let izkušenj in stabilne dostave. Vabljeni, da nas kontaktirate.

Zakaj je dolge peptide težko narediti?
Kdor se je ukvarjal s sintezo peptidov, ve, da težava nastane, ko je peptidna veriga dolga: znotraj 20 aminokislin to zmore večina podjetij. Ko gre za več kot 40 aminokislin, začnemo izbirati zaporedje. Pri 60 aminokislinah ali več se število podjetij, ki lahko prevzamejo, zmanjša za polovico. Ko gre za več kot 100 aminokislin, ni veliko podjetij, ki bi si to upala.

 

Zakaj? Ker dolga peptidna sinteza naleti na številne pasti:

Učinkovitost sinteze se zmanjša: z vsakim podaljšanjem aminokisline bo izkoristek enkrat znižan. 30 peptid aminokisline, vsak korak 99-odstotnega izkoristka, končni izkoristek je še vedno 74-odstoten; 60 aminokislin, vsak korak je še vedno 99%, končni izkoristek je samo 55%. Pravzaprav izkoristek mnogih korakov ne more doseči 99 %.
Hidrofobna agregacija: Ko je v dolgem peptidu veliko hidrofobnih aminokislin, se peptidna veriga začne "zlepljati" na smolo in aminokisline za njo ne morejo vstopiti.

Težava pri čiščenju: zadrževalni čas dolgih peptidov in nečistoč je preblizu drug drugemu za čist rez.
Slaba topnost: Ko je peptid pridobljen, ga ni mogoče raztopiti, zato poskusa ni mogoče izvesti.
Bili smo že v teh luknjah in vemo, kako jih obiti.

1. Dolžina: 50-189 aminokislin

2. Strategija segmentirane sinteze
Najučinkovitejši način za reševanje dolgih peptidov je njihovo segmentiranje:
Izbira segmenta: Dolgi peptid razrežite na 2-4 segmente po 30-60 aminokislin. Rezalna točka mora biti na mestu, kjer je težava pri sintezi majhna, na primer, izogibanje neprekinjenemu hidrofobnemu območju.
Sinteza fragmentov: Vsak fragment se sintetizira in prečisti posamično do dovolj visoke čistosti.
Spajanje fragmentov: spajanje fragmentov skupaj v raztopini ali na smoli. Metoda spajanja je lahko naravna kemična ali encimska.
Zlaganje: Če ima peptid disulfidno vez, ga je treba po spajanju zviti v pravilno konformacijo.

3. Čistost: odvisno od eksperimentalnih zahtev

Vsak dolg peptid spremlja poročilo HPLC in MS, zaradi česar so podatki o čistosti pregledni.

4. Modifikacije: dolgi peptidi lahko dodajo tudi funkcijo
Fluorescentno označevanje: FITC, TAMRA, želim videti, kje teče dolgi peptid.
Biotin: Potegnite-dol ali preizkusite.
Označevanje izotopov: za kvantifikacijo NMR ali masne spektrometrije.
Fosforilacija/glikozilacija: posnemanje post{0}}translacijskih sprememb.

1. To delamo že 20 let
Sinteza dolgih peptidov ni nekaj, kar lahko naredi vsak. V preteklih letih smo obravnavali veliko dolgih peptidov: transmembranske beljakovinske fragmente, virusne fuzijske peptide, amiloidne proteine, protimikrobne peptide itd. Dobro vemo, katera zaporedja je enostavno združiti in kateri pogoji jih lahko rešijo. Če pridete k nam na Long Peptide Synthesis, vam vsaj ni treba stopiti na jamo od začetka.

2. Frakcijska sinteza: ne samo rezanje na kose
Segmentacija se sliši preprosto, vendar je pomembno, kje rezati, kako dolg je posamezen segment in kako ju povezati. Imamo več načel:
Rez v hidrofilni coni: Izogibajte se rezanju v hidrofobnem jedru, sicer se bodo segmenti zbrali sami.
Uravnotežite dolžino fragmentov: ne naredite enega segmenta posebej težko narediti, drugih segmentov pa še posebej enostavno. 3.
Izbira priključne točke: Naravne kemične povezave zahtevajo tioester na C-terminalu in Cys na N-terminalu, ki morata biti zasnovana vnaprej.

3. Hidrofobni peptidi: poseben sistem topil.
Nekateri dolgi peptidi so tako hidrofobni, da jih ni mogoče raztopiti z običajnimi topili, zato se bodo med sintetizacijo zlepili na smolo. Imamo poseben sistem topil in dodatke, ki ohranjajo raztezanje peptidne verige med procesom sinteze, tako da lahko vstopijo naslednje aminokisline.

4. Nadzor kakovosti: podatki na vsakem koraku
Nadzor kakovosti dolgih peptidov je bolj zapleten kot nadzor kratkih peptidov:
Kontrola kakovosti intermediatov: po sintezi vsakega fragmenta najprej izmerite čistost in molekulsko maso, nato pa nadaljujte z naslednjim korakom, ko opravite test.
Spremljanje procesa spajanja: vzorčite reakcijo povezave in izmerite MS, da vidite učinkovitost povezave.
Pregled končnega izdelka: HPLC za čistost, MS za molekulsko maso, MS/MS za pravilnost zaporedja (neobvezno).
Preskus topnosti: navedite priporočena topila in metode solubilizacije, da ne boste dobili peptidov, ki se ne raztopijo.
Pri dolgi peptidni sintezi podatki govorijo sami zase in vsak korak je sledljiv.

5. Od miligramov do sto miligramov, vse do konca
Miligrami za fazo presejanja, deset miligramov za fazo validacije, sto miligramov za strukturno študijo - lahko vzamemo vse. Isti projekt, isti primerek, ni potrebe po ponovnem-usklajevanju.

• Dostava: Liofiliziran prašek, centrifugalne epruvete ali viale, zaščitene z dušikom.
• Spremni dokumenti: COA (HPLC profil + MS profil), MS/MS (potrditev sekvence neobvezna), poročilo o sintezi (postopek segmentacije in spajanja).
• Izbirni testi: vsebnost peptidov, endotoksin, vlaga, aminokislinska sestava, test topnosti.
• Pakiranje po meri: porcioniranje in označevanje glede na vaše zahteve.
• Vsak izdelek Long Peptide Synthesis je dvakrat -preverjen, da se zagotovi, da je zaporedje pravilno in čistost v skladu s standardom, preden se pošlje.

Ne glede na to, ali želite transmembranski peptid 80aa ali virusni protein 150aa, se lahko pogovorite z nami. Če od Science-Peptide zahtevate Long Peptide Synthesis, vam vsaj ni treba poskušati enega za drugim.

Povedati mi moraš:
Peptidno zaporedje (ali ciljne informacije)
Koliko (miligramov)
zahteve glede čistosti
nimajo disulfidnih vezi ali drugih modifikacij

Kdaj ga želite?

V 24 urah vam zagotovimo oceno izvedljivosti in ponudbo.