Težka in hidrofobna sinteza peptidov

Težavna sinteza peptidov|Prilagoditev hidrofobnega peptida|Težavna sinteza peptidov|Sinteza zaporedja grozdov|Znanstveni-peptid

Peptidno zaporedje preveč hidrofobno? Enostavno združevanje? Več parov disulfidnih vezi? Storitve Science-Peptide's Difficult Peptide Synthesis in Hydrophobic Peptide Synthesis so specializirane za vse vrste "ne morem narediti". 20 let izkušenj, posebne sisteme topil, stabilno dostavo. Kontaktirajte nas.

Katere vrste peptidov veljajo za "težke"?
Ker sem že 20 let v poslu s sintezo peptidov, sem videl vse vrste težkih peptidov. Ko stranke pridejo k nam, so povprašale že več podjetij, odgovor, ki ga dobijo, pa je ali »Ne morem« ali »Poskusite, ni garancije«.

Peptid z močno hidrofobnostjo: transmembranska regija, signalni peptid, hidrofobna aminokislina, ko se sintetizira, se zlepi na smolo in aminokislina za njim ne bo mogla vstopiti.
Peptidi, ki se zlahka agregirajo, kot so amiloidni in protimikrobni peptidi, se pri sintetizaciji naberejo in po čiščenju zamašijo kolono.
Peptidi z več pari disulfidnih vezi: več kot trije pari, en napačen korak v vrstnem redu združevanja in celotna molekula je uničena.
Dolg peptid: več kot 60 aminokislin, z vsakim korakom se izkoristek zmanjšuje in na koncu ne ostane nič.
Kompleksna kombinacija modifikacij: fosforilacija, fluorescenca, ciklizacija in pogoji, ki se borijo med seboj.
Lahko jih vzamemo vse in to ni "poskusi", ampak "imaj načrt".

1. Hidrofobni peptidi: s posebnimi sistemi topil
Težava hidrofobnih peptidov je v tem, da jih ni mogoče raztopiti v običajnih topilih, in ko se sintetizirajo, se peptidna veriga "zlepi" na smolo, kar onemogoči vstop aminokislin, ki so za njo.

Naša rešitev:
Posebna kombinacija topil: DMF, NMP, DCM mešani sistem, plus malo tekočega sredstva za sproščanje, tako da je peptidna veriga ostala raztegnjena.
Optimizacija temperature: nekatere reakcije so boljše pri 40 stopinjah kot pri sobni temperaturi, nekatere je treba znižati na 0 stopinj, poskusili smo jih eno za drugo.
Izbira smole: za hidrofobne peptide uporabite smolo z visoko topnostjo, da pustite dovolj prostora za peptidne verige.
Solubilizirane oznake: Če ne morete, dodajte hidrofilno oznako in jo po sintezi odrežite.

Resnični primer: transmembranski peptid 35aa, hidrofobne aminokisline predstavljajo 70%, stranka je iskala tri podjetja, ni mogoče storiti. Spremenili smo sistem topil in dodali nalepko za raztapljanje, končno je bila čistost 92 % in stranka je gladko opravila študijo strukture.

2. Več parov disulfidnih vezi: brez sreče, strategija
Več kot je disulfidnih vezi, težje jih je povezati. Dva para sta v redu, a trije ali več parov in en napačen korak in vsega je konec.
Naša strategija:
Ortogonalna zaščita: Cys je mogoče odpreti in združiti v korakih z uporabo različnih zaščitnih skupin, kot so Trt, Acm, tBu.
Optimizacija oksidacijskih pogojev: zračna oksidacija, oksidacija glutationa, oksidacija joda, različne metode za različne peptide.
Vmesni QC: Po vsakem paru vzemite vzorec za MS in potrdite par, preden nadaljujete.
Potrditev MS/MS (neobvezno): končna prekinitev-s sekundarno masno spektrometrijo, da vidimo, kje so disulfidne vezi dejansko pritrjene.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >90% čistost, pravilno uparjene disulfidne vezi, kristalno strukturo pa naknadno reši naročnik.

3. Peptidi,-nagnjeni k agregaciji: sintetizirajo med obrambo
Nekateri peptidi naravno radi agregirajo, na primer amiloidni protein in antibakterijski peptid. Začnejo se agregirati, ko so sintetizirani, blokirajo kolono, ko so prečiščeni, in jih ni mogoče raztopiti, ko so v roki.
Naša rešitev:
Psevdoprolin: Psevdoprolin se uvede na položaj Ser/Thr, da prekine težnjo agregacije in se po sintezi spremeni nazaj.
Segmentna sinteza: Peptidi, ki so preveč polimerizirani, se razrežejo na več segmentov in sintetizirajo ločeno, nato pa se na koncu ponovno povežejo.
Optimizacija pogojev čiščenja: visoka temperatura, kisli pH, dodajanje organskih topil za iskanje pogojev, zaradi katerih ne-polimerizira.

4. Kompleksne kombinacije modifikatorjev: pogoji brez bojev
Nekateri peptidi imajo več zahtev: fosforilacijo, fluorescentno označevanje in ciklizacijo. Te spremembe so lahko med seboj v nasprotju - na primer, fosforilacija je kislinsko-fobna, fluorescenčno označevanje je svetlobno-fobno, ciklizacija pa zahteva določen pH.
Naš pristop:
Zasnova strategije ohranjanja: katero obrezovanje narediti najprej, katero obrezovanje pozneje, načrtovano vnaprej.
Ortogonalni pogoji: pogoji vsakega koraka reakcije ne vplivajo na že izvedene spremembe.
Vmesni QC: Po vsakem koraku spreminjanja vzemite vzorec, da se prepričate, ali je pravilno izveden, preden nadaljujete.

5. Čistost: odvisno od tega, kaj počnete z njim

Vsak peptid spremlja poročilo HPLC in MS, zaradi česar so podatki o čistosti pregledni.

1. To delamo že 20 let
Težavna sinteza peptidov ni nekaj, kar lahko stori vsak. V preteklih letih smo obravnavali veliko težavnih peptidov: transmembranske proteine, virusne fuzijske peptide, konotoksine, amiloidne proteine, protimikrobne peptide itd. Dobro vemo, katera zaporedja so nagnjena k težavam in katera stanja jih lahko rešijo. Vsaj ni vam treba preizkusiti vsakega od njih, če pridete k nam zaradi težke in hidrofobne peptidne sinteze.

2. Ni "poskusi", ampak "imaj program".
Veliko podjetij se loti težkih peptidov in reče: "Poskusili bomo, vendar tega ne jamčimo". Ne igramo tako. Pred prevzemom naročila bomo ocenili zaporedje, kakšen je delež hidrofobnih aminokislin, ali je znana tendenca agregacije, koliko parov disulfidnih vezi in ali je modifikacija kompleksna ali ne. Po oceni vam bomo povedali: kakšna je stopnja uspešnosti in kako dolg je čas cikla.

Ne sprejemamo naročil, ki jih ni mogoče izvesti, in naročila, ki smo jih sprejeli, moramo predati.

3. Specializirani sistemi topil za hidrofobnost
Hidrofobni peptid je naša močna točka. Če običajnega topila ni mogoče raztopiti, bomo topilo zamenjali; če običajna temperatura ne reagira, bomo temperaturo prilagodili; če običajna smola ne zdrži, bomo smolo zamenjali. Obstaja tudi oznaka za raztapljanje kot povratni izhod.

4. Več parov disulfidnih vezi, korak-za-korak
Če obstajajo več kot trije pari disulfidnih vezi, bomo uporabili pristop-za-koraki: prvi korak je zaščititi A in odpreti prvi par; zaščitite B in odprite drugi par; zaščitite C in odprite tretji par. Po vsakem koraku vzamemo vzorce za MS in potrdimo združitev, preden nadaljujemo. Končno bo MS/MS pokvarjen in preverjen, podatki pa vam bodo dani brez vašega ugibanja.

5. Nadzor kakovosti: podatki na vsakem koraku
Nadzor kakovosti zahtevnih peptidov mora biti bolj previden:
Vmesni QC: Po vsakem fragmentu in vsakem koraku modifikacije najprej izmerite čistost in molekulsko maso.
Končni produkt: HPLC za čistost, MS za molekulsko maso.
Preskus topnosti: navedite priporočena topila in metode solubilizacije, da ne boste dobili peptidov, ki se ne raztopijo.
Pri težki in hidrofobni peptidni sintezi podatki govorijo sami zase, vsakemu koraku je mogoče slediti.

• Oblika dostave: liofiliziran prašek, centrifugalne epruvete ali viale.
• Spremni dokumenti: COA (HPLC profil + MS spekter), sintezno poročilo (neobvezno).
• Izbirni testi: vsebnost peptidov, endotoksin, vlaga, aminokislinska sestava, test topnosti.
• Pakiranje po meri: porcioniranje in označevanje glede na vaše zahteve.
• Vsak težaven in hidrofobni produkt sinteze peptidov je pregledan, da se zagotovi pravilno zaporedje in čistost na standardu, preden se pošlje.

Ne glede na to, ali so vas drugi zavrnili ali tega ne zmorete v svojem laboratoriju, se lahko pogovorite z nami. Če iščete znanstveni-peptid za težko in hidrofobno sintezo peptidov, vam vsaj ni treba poskušati enega za drugim.

Povedati mi moraš:
Peptidno zaporedje (ali ciljne informacije)
Je to že kdo drug delal? Kakšen je rezultat?
Koliko (miligramov)
zahteve glede čistosti

Kdaj ga želite?

V 24 urah vam zagotovimo oceno izvedljivosti in programsko ponudbo.